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宁波欧曼生物科技有限公司
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异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷
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异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷
异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷
IPTG
IPTG 中文品名: 异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷 商品名称: Isopropyl β-D-1-Thiogalactopyranoside 英文简称: IPTG 产品别名: Isopropyl β-D-Thiogalactoside 通用CAS : 367-93-1 产品纯度: Sigma ≥99%, Merck ≥98% ,INALCO≥99% 产品性状: 白色或白色粉末,溶于水后呈清亮无色液体 分 子 式: C9H18O5S 分 子 量: 238.30 保存温度: 2-8°C冷藏保存,配制好后保存于-20°C,室温可放置一个月 主要作用:异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一种作用极强的诱导剂,不被细*代谢而十分稳定,因此被实验室广泛应用。 IPTG是β–半乳糖苷酶的活性诱导物质。基于这个特性,当pUC系列的载体DNA(或其他带有lacZ 基因载体DNA)以lacZ 缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体的载体DNA进行转染时,如果在平板培养基中加入X–gal和IPTG,由于β–半乳糖苷酶的α–互补性,可以根据是否呈现白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑选出基因重组体。此外,它还可以作为具有lac或tac等启动子的表达载体的表达诱导物使用。编辑本段诱导原理首先
E.coli的乳糖操纵子(元)含Z、Y及A三个结构基因,分别编码半乳糖苷酶、透酶和乙酰基转移酶,此外还有一个操纵序列O、一个启动序列P及一个调节 基因I。I基因编码一种阻遏蛋白,后者与O序列结合,使操纵子(元)受阻遏而处于关闭状态。在启动序列P上游还有一个分解(代谢)物基因激 活蛋白(CAP)结合位点。由P序列、O序列和CAP结合位点共同构成lac操纵子的调控区,三个酶的编码基因即由同一调控区调节,实现基因产物的协调表 达 。
其次
在没有乳糖存在时,lac操纵子(元)处于阻遏状态。此时,I序列在PI启动序列操纵下表达的Lac阻遏蛋白与O序列结合,阻碍RNA聚合酶与P序列结 合,抑制转录起动。当有乳糖存在时,lac操纵子(元)即可被诱导。在这个操纵子(元)体系中,真正的诱导剂并非乳糖本身。乳糖进入细胞,经β-半乳糖苷酶催化,转变为半乳糖。后者作为一种诱导剂分子结合阻遏蛋白,使蛋白构象变化,导致阻遏蛋白与O序列解离、发生转录。异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的作用与半乳糖相同,是一 种作用极强的诱导剂,不被细*代谢而十分稳定,因此被实验室广泛应用。编辑本段使用方法 首先把IPTG配制成23.83 mg/ml(100 mM)的水溶液,并进行过滤除菌后保存。然后在100 ml的琼脂培养基中,加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal(20 mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100 μl的Amp(100 mg/ml),制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培养基。当DNA片段插入*pUC系列载体(或其他带有lacZ、Amp基因载体),然后转化*lacZ缺失细胞中后,涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培养基,可根据长出菌体的蓝白色,而方便地挑选出基因重组体(白色为具有DNA插入片段的基因重组体)。
作用 诱导外源基因的表达,普遍应用于原核表达系统,使其表达量增高,产物稳定,具有易鉴定,易纯化的优点。
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